液相色譜柱是液相色譜(HPLC)中關(guān)鍵的組成部分,主要由柱管、壓帽/卡套、篩板(濾片)等組成。其孔徑和比表面積對分離效果有重要影響:孔徑小、比表面積大有利于增強(qiáng)保留和分離度,但可能增加背壓;孔徑大、比表面積小則適用于梯度分析。
液相色譜柱的工作原理主要基于樣品在流動(dòng)相和固定相之間的分配。當(dāng)樣品通過色譜柱時(shí),不同物質(zhì)分子與固定相的親和力不同,導(dǎo)致它們在柱中的停留時(shí)間不同,從而實(shí)現(xiàn)分離。這種分離過程是在載氣的推動(dòng)下,樣品組分在流動(dòng)相(氣體或液體)和固定相之間反復(fù)分配完成的。
1、檢查色譜柱信息
確認(rèn)色譜柱型號、規(guī)格(如柱長、內(nèi)徑、填料類型)、適用流動(dòng)相范圍(如pH、有機(jī)溶劑比例)及最大操作壓力。
檢查色譜柱兩端是否有保護(hù)套,避免填料暴露或污染。
2、選擇適配接頭與管路
使用與色譜柱接口匹配的接頭(如PEEK、不銹鋼),避免漏液或死體積。
確保管路內(nèi)徑與色譜柱接口一致(通常為1/16英寸),減少柱外展寬效應(yīng)。
3、流動(dòng)相預(yù)處理
脫氣:使用超聲波脫氣或在線脫氣裝置去除溶解氣體,防止氣泡干擾基線或損壞柱子。
過濾:通過0.22μm或0.45μm濾膜過濾流動(dòng)相,避免顆粒堵塞柱子。
平衡pH:若使用緩沖鹽,需調(diào)節(jié)pH至填料耐受范圍(如C18柱通常pH 2-8)。