液相色譜柱是液相色譜分析的核心組件,主要用于分離和純化樣品中的不同成分。液相色譜柱是液相色譜儀的核心部件,通過(guò)固定相與流動(dòng)相的相互作用差異,實(shí)現(xiàn)樣品中各組分的有效分離。其性能直接影響分析的分辨率、靈敏度和效率,是方法開(kāi)發(fā)與優(yōu)化的關(guān)鍵要素。
樣本進(jìn)入流路后,流動(dòng)相會(huì)將樣本輸送至色譜柱,樣本中的各組分與固定相發(fā)生相互作用,由于不同組分與固定相的作用力不同,從而以不同的速率在色譜柱中移動(dòng),實(shí)現(xiàn)分離。
物理結(jié)構(gòu)
液相色譜柱通常為圓柱形壓力容器,由不銹鋼、鈦合金或耐腐蝕材料制成,內(nèi)部填充顆粒狀固定相(如硅膠基質(zhì)鍵合相、聚合物填料等)。柱兩端配有篩板,防止填料流失并保持流動(dòng)相均勻通過(guò)。
分離原理
基于樣品組分在固定相與流動(dòng)相間分配行為的差異:
吸附-解吸:組分與固定相表面發(fā)生物理吸附,吸附力強(qiáng)的組分遷移慢。
分配作用:組分在固定相與流動(dòng)相間分配,極性相似的組分保留時(shí)間長(zhǎng)。
離子交換:帶電組分與固定相上的離子基團(tuán)發(fā)生交換,電荷密度高的組分保留強(qiáng)。
尺寸排阻:大分子無(wú)法進(jìn)入固定相孔隙,直接流出;小分子進(jìn)入孔隙被延遲。
不同組分因相互作用力差異,在柱中遷移速度不同,后按順序流出并被檢測(cè)器記錄,形成色譜峰。
保存方法:短期保存用高有機(jī)相(如甲醇)充滿(mǎn)柱子;長(zhǎng)期保存需根據(jù)固定相類(lèi)型選擇溶劑(如反相柱用甲醇,正相柱用正己烷)。